目的 觀察重組腺相關(guān)病毒-色素上皮衍生因子(rAAV2-PEDF)對(duì)氧誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜新生血管(RNV)的作用。方法 選擇3日齡C57BL6小鼠22只,左眼為實(shí)驗(yàn)眼,右眼為對(duì)照眼,微量注射器玻璃體腔分別注射rAAV2-PEDF和rAAV2-綠色熒光蛋白1 mu;l。注射后立即將小鼠放入氧箱,建立氧誘導(dǎo)血管增生性視網(wǎng)膜病變模型。取13日齡小鼠4只提取視網(wǎng)膜總蛋白,蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)色素上皮衍生因子(PEDF)蛋白表達(dá)。17日齡小鼠12只,熒光素心臟灌注視網(wǎng)膜鋪片觀察血管形態(tài)和分布。17日齡小鼠6只,視網(wǎng)膜冰凍切片外源凝集素標(biāo)記后染色觀察血管形態(tài)和分布。Image-Pro Plus 5.1軟件測(cè)量分析無(wú)熒光素灌注區(qū)和RNV的絕對(duì)面積和相對(duì)面積。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)眼PEDF蛋白表達(dá)顯著高于對(duì)照眼。視網(wǎng)膜鋪片定量結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)眼和對(duì)照眼絕對(duì)無(wú)灌注區(qū)面積分別為(0.96 plusmn;0.22)、(1.96 plusmn;0.34) mm2,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-8.554,P<0.01);相對(duì)無(wú)灌注區(qū)面積分別為(8.64 plusmn;1.52)%、(17.27 plusmn;2.98)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-8.97,P<0.01)。實(shí)驗(yàn)眼和對(duì)照眼絕對(duì)新生血管面積分別為(0.37 plusmn;0.11)、(1.26 plusmn;0.38) mm2,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-7.8, P<0.01);相對(duì)新生血管面積分別為(3.96 plusmn;0.66)%、(11.45 plusmn;2.06)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-8.51, P<0.01)。外源凝集素標(biāo)記定量結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)眼和對(duì)照眼RNV面積分別為(0.11 plusmn;0.003)、(0.41 plusmn;0.02) mm2,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-5.14,P<0.01)。結(jié)論 rAAV2-PEDF可成功轉(zhuǎn)染小鼠視網(wǎng)膜組織并穩(wěn)定表達(dá)PEDF蛋白,不僅可以減少氧誘導(dǎo)血管增生性視網(wǎng)膜病變小鼠視網(wǎng)膜無(wú)灌注面積,而且可顯著抑制RNV生成。
引用本文: 李濤,丁小燕,馬紅婕,梁小玲,羅燕,唐仕波. 重組腺相關(guān)病毒-色素上皮衍生因子抑制氧誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜新生血管的作用. 中華眼底病雜志, 2010, 26(3): 212-214. doi: 復(fù)制