目的 觀察雙孔鉀離子通道蛋白（TRAAK K2P）持續(xù)性激動(dòng)劑利魯唑?qū)κ宥』^氧化氫（t-BHP）誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮（hRPE）細(xì)胞氧化損傷的作用，探討其作用機(jī)制。方法 原代培養(yǎng)hRPE細(xì)胞，取第3~5代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將hRPE細(xì)胞分為正常對(duì)照組、模型組和2、5、10、20 mu;mol/L加藥組及利魯唑單藥組。采用噻唑藍(lán)比色法檢測(cè)各組細(xì)胞存活率，以此確定利魯唑最佳干預(yù)濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將hRPE細(xì)胞分為正常對(duì)照組、模型組、模型加藥組及利魯唑單藥組，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞的正常細(xì)胞率和早期凋亡率；倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞的形態(tài)變化；激光共聚焦顯微鏡觀察各組細(xì)胞核的形態(tài)變化和TRAAK K2P表達(dá)。結(jié)果與模型組比較，僅有10 mu;mol/L模型加藥組細(xì)胞存活率明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.84，P＜0.05）。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，正常對(duì)照組、模型組、模型加藥組及利魯唑單藥組正常細(xì)胞率分別為（97.6 plusmn;1.3）%、（70.3 plusmn;7.0）%、（86.9 plusmn;5.2）%、（93.9 plusmn;1.5）%；正常對(duì)照組、模型加藥組及利魯唑單藥組分別與模型組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.53、4.59、6.49，P＜0.05）；模型加藥組與正常對(duì)照組、利魯唑單藥組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.94、1.91，P＞0.05）。細(xì)胞早期凋亡率分別為（1.37 plusmn;0.98）%、（25.50 plusmn;8.02）%、（1.20 plusmn;0.72）%、（5.20 plusmn;2.00）%，正常對(duì)照組、模型加藥組及利魯唑單藥組分別與模型組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.07、7.13、5.94，P＜0.05）；模型加藥組與正常對(duì)照組、利魯唑單藥組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.06、1.18，P＞0.05）。正常對(duì)照組及利魯唑單藥組細(xì)胞呈梭形或多角形，細(xì)胞核呈均勻規(guī)則的橢圓形；模型組部分細(xì)胞腫脹、變圓、漂浮及細(xì)胞核固縮；模型加藥組個(gè)別細(xì)胞腫脹、變圓和細(xì)胞核固縮。正常對(duì)照組、模型組、模型加藥組及利魯唑單藥組TRAAK K2P表達(dá)分別為0.040 plusmn;0.003、0.041 plusmn;0.001、0.049 plusmn; 0.001、0.055 plusmn;0.001。4組間TRAAK K2P表達(dá)比較，模型組與正常對(duì)照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.80，P＞0.05）；模型加藥組、利魯唑單藥組與正常對(duì)照組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.40、12.70，P＜0.05）。結(jié)論 利魯唑能在早期凋亡階段保護(hù)hRPE細(xì)胞免受t-BHP誘導(dǎo)的氧化損傷。利魯唑上調(diào)TRAAK K2P蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)可能是其機(jī)制之一。
引用本文： 沈朝蘭,李楚,朱曉波,鄭文斌,夏仁春. 雙孔鉀離子通道激動(dòng)劑利魯唑?qū)κ宥』^氧化氫誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞氧化損傷的作用. 中華眼底病雜志, 2013, 29(4): 400-405. doi: 復(fù)制