目的 觀察人玻璃體液體外培養(yǎng)誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化作用。 方法 將3~5代傳代人RPE細(xì)胞分為普通培養(yǎng)組和玻璃體液培養(yǎng)組,分別應(yīng)用普通培養(yǎng)液和25%玻璃體液進(jìn)行培養(yǎng)。采用相差顯微鏡觀察兩組細(xì)胞形態(tài)變化,細(xì)胞爬片檢測(cè)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的變化。分別用細(xì)胞劃痕法、Transwell小室侵襲法及Ⅰ型膠原凝膠收縮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移、侵襲及收縮力的變化。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè) alpha;-平滑肌肌動(dòng)蛋白( alpha;-SMA)和Snail1 mRNA的表達(dá)。 結(jié)果 相差顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),普通培養(yǎng)組細(xì)胞保持扁平形態(tài),細(xì)胞接觸廣泛;玻璃體液培養(yǎng)組細(xì)胞一端呈扇形,另一端呈錐形拖尾形或梭形,細(xì)胞生長(zhǎng)呈彼此分離的方式。細(xì)胞爬片結(jié)果顯示,普通培養(yǎng)組肌動(dòng)蛋白骨架主要分布于RPE細(xì)胞周邊部,形如細(xì)胞周邊的條帶狀;玻璃體液培養(yǎng)組肌動(dòng)蛋白纖維在細(xì)胞的一端重排,形成扇形扁平狀偽足突起,而在細(xì)胞另一端形成錐形拖尾改變。玻璃體液培養(yǎng)組與普通培養(yǎng)組比較,RPE遷移及侵襲能力顯著增強(qiáng)(t=14.190、22.630)、細(xì)胞收縮能力顯著下降(t=6.221),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,玻璃體液培養(yǎng)組與普通培養(yǎng)組比較,Snail1 mRNA表達(dá)顯著上升(t=3.218,P=0.032), alpha;-SMA mRNA表達(dá)顯著下降(t=3.990,P=0.016),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 玻璃體液培養(yǎng)可誘導(dǎo)RPE細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化。這一作用通過(guò)增強(qiáng)RPE細(xì)胞遷移及侵襲能力,抑制RPE細(xì)胞收縮力;提高RPE細(xì)胞Snail1 mRNA表達(dá),下調(diào) alpha;-SMA mRNA表達(dá)實(shí)現(xiàn)。
引用本文: 黃雄高,張少?zèng)_,魏雁濤,馬海智,張釗填,張婷. 玻璃體液誘導(dǎo)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化作用. 中華眼底病雜志, 2013, 29(2): 166-170. doi: 復(fù)制