目的 構(gòu)建人堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)真核表達質(zhì)粒，研究其在體內(nèi)外的表達。方法 通過基因克隆技術(shù)，構(gòu)建并大量制備pcDNA3.1/myc-His(-)C-bFGF真核表達體系，RT-PCR和細胞免疫組織化學方法檢測體外瞬時表達情況；直流電脈沖介導重組質(zhì)粒pcDNA3.1/myc-His(-)C-bFGF和pCD2-血管內(nèi)皮細胞生長因子121(vascular endothelial growth factor, VEGF121)在兔頸部肌肉瓣內(nèi)轉(zhuǎn)移并表達，測定其促血管生成的生物學效應。結(jié)果 構(gòu)建的pcDNA3.1/myc-His(-)C-bFGF真核表達體系成功轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)HeLa細胞，目的基因在mRNA水平和蛋白水平均有表達。pcDNA3.1/myc-His(-)C-bFGF和pCD2-VEGF121重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染在體肌瓣，獲得外源基因高水平表達。轉(zhuǎn)基因肌肉發(fā)生血管增生、血流增強的生物學效應。結(jié)論 構(gòu)建了人bFGF真核表達質(zhì)粒，并可在體內(nèi)外順利表達，為進一步組織移植或組織工程基因治療研究奠定了基礎。
引用本文： 張啟旭,周剛,陸佳韻,劉芝華. 堿性成纖維細胞生長因子真核表達載體的構(gòu)建及表達. 中國修復重建外科雜志, 2004, 18(5): 435-439. doi: 復制
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