目的 探討構建人骨形成蛋白2（human bone morphgenetic protein 2，hBMP-2）真核表達載體的方法。 方法 由人成骨肉瘤細胞中提取細胞總RNA，利用RT-PCR方法擴增獲得hBMP-2基因cDNA，將基因片斷重組到pGEM-T質粒中構建pGEMT- hBMP-2重組質粒載體，轉化到大腸桿菌DH5α后篩選陽性克隆，利用限制性酶切和DNA序列分析鑒定重組質粒。分別用EcoR Ⅰ和Not Ⅰ雙酶切pGEM-T- hBMP-2 質粒和pcDNA3.1(+)真核表達載體，將克隆載體中hBMP基因重組到pcDNA3.1(+)真核表達載體 ，提取質粒作酶切電泳、PCR鑒定及DNA測序。 結果 人骨肉瘤細胞中經RT-PCR得到1.2 kbp的hBMP-2擴增條帶，重組質粒pGEM-T-hBMP-2經酶切電泳可見1.2 kbp的hBMP-2條帶和4.0 kbp的載體片斷；pcDNA3.1-hBMP-2 質粒經酶切電泳可見1.2 kbp的hBMP2條帶和5.0 kbp的載體片斷，重組質粒酶譜分析與預期一致；DNA序列分析測序結果校對后經BLAST分析，表明核酸序列與Gene Bank中和hBMP-2 的mRNA序列完全吻合。 結論 通過此方法能成功克隆獲得hBMP-2基因，并構建其真核表達載體。
引用本文： 田曉濱,孫立,楊述華. 克隆并構建人骨形成蛋白2真核表達載體. 中國修復重建外科雜志, 2006, 20(2): 112-115. doi: 復制
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