目的 建立人骨髓間充質干細胞（human marrow mesenchymalstem cells ,hMSCs）體外低氧培養(yǎng)及向成骨細胞分化的生物模型，研究其生物學特征，為骨組織工程提供實驗依據。方法 采用人淋巴細胞分離液分離健康成人hMSCs，DMEM-LG（含20％胎牛血清）中培養(yǎng)，10～14 d后傳代培養(yǎng)。取第2代細胞，根據培養(yǎng)氧濃度及培養(yǎng)基類型分為4組：正常氧組（20％O.2加DMEM-LG，A組）、低氧組（1％O.2加DMEM-LG，B組）、正常氧成骨誘導組（20％O.2加條件培養(yǎng)基，C組）及低氧成骨誘導組（1％O.2加條件培養(yǎng)基，D組），通過細胞計數(shù)、細胞增殖測定（MTT法）、集落形成檢測、RT-PCR檢測、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性檢測及茜素紅染色，研究低氧環(huán)境對hMSCs生物學行為的影響。結果 與A組相比，B組及D組中的hMSCs有較高的增殖速度，并且不受條件培養(yǎng)基的影響，比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。B組中的hMSCs生成的集落逐漸增多，A組9 d后生成的集落數(shù)基本不發(fā)生變化。D組培養(yǎng)的hMSCs 的ALP活性逐漸增高，但明顯低于C組，兩者差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。定量RT-PCR檢測，C組ALP、骨鈣素、Ⅰ型膠原蛋白及骨粘連蛋白mRNA表達量明顯增加（P＜0.01)。培養(yǎng)4周后，與其他3組相比，C組可見到明顯的鈣鹽沉積和染成紅色的鈣結節(jié)。結論 低氧使hMSCs增殖率增加，集落形成能力增強，抑制向成骨細胞分化。

引用本文： 王慶德,楊述華,楊操,葉哲偉,胡勇. 成人骨髓間充質干細胞體外低氧培養(yǎng)及生物學特征. 中國修復重建外科雜志, 2007, 21(10): 1128-1132. doi: 復制

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