目的 利用重組腺病毒載體將生長分化因子5（growth and differentiation factor 5，GDF-5）基因導入hBMSCs，研究GDF-5 基因的表達和對hBMSCs 成骨分化的影響。 方法 將重組腺病毒GDF-5（adenovirus GDF-5，Ad-GDF-5） [ 含綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）標記] 和空載腺病毒Ad-GFP 進行擴增并測定滴度，并以不同滴度兩種病毒感染第3 代hBMSCs，干預后2 d 熒光顯微鏡下觀察GFP 表達情況，RT-PCR 檢測GDF-5 在hBMSCs中的表達。取第3 代貼壁hBMSCs 隨機分為4 組：實驗組（GDF-5 基因轉染組）、成骨誘導組、空載組和對照組。于干預后不同時間行倒置相差顯微鏡觀察、熒光顯微鏡觀察、熒光定量RT-PCR、免疫熒光染色和von Kossa 染色檢測細胞分化情況。 結果 Ad-GDF-5 滴度為1.0 × 109 pfu/mL，Ad-GFP 滴度為1.2 × 109 pfu/mL。Ad-GDF-5 及Ad-GFP 均能對hBMSCs 有效感染，并使其表達目的基因和GFP 基因。干預后1 ～ 7 d 實驗組和成骨誘導組hBMSCs 細胞形態(tài)及生長方式向成骨細胞轉化，而對照組和空載組hBMSCs 仍保持原有形態(tài)及生長方式。熒光定量RT-PCR 檢測示，干預后4 d 實驗組GDF-5 基因表達明顯高于其余各組（P lt; 0.05）；實驗組和成骨誘導組ALP、Col Ⅰ、骨鈣素基因表達均高于空載組和對照組（P lt; 0.05），成骨誘導組Col Ⅰ基因表達高于實驗組（P lt; 0.05）。干預后4 d，免疫熒光染色示成骨誘導組和實驗組細胞表達并分泌Col Ⅰ，空載組和對照組細胞未見Col Ⅰ表達。干預后10 d，成骨誘導組和實驗組細胞von Kossa 染色為陽性，對照組和空載組為陰性。 結論 GDF-5 基因可通過腺病毒載體導入hBMSCs 穩(wěn)定表達，并促使其成骨分化，為進一步研究這種轉基因hBMSCs 修復骨組織奠定了基礎。
引用本文： 程相俊,劉浩,張霆,黃巧蓉. 腺病毒介導的生長分化因子5 基因對hBMSCs 成骨分化的影響. 中國修復重建外科雜志, 2009, 23(8): 985-990. doi: 復制