目的 探討缺氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α）及細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2（extracellular signal-regulated kinase1/2，ERK1/2）在體外培養(yǎng)的胎鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元缺氧缺血再灌注后變化的趨勢及其相互關(guān)系。 方法 取15 只16 ～ 18 d 孕齡SD 大鼠的大腦皮層，進(jìn)行皮質(zhì)神經(jīng)元原代培養(yǎng)，取培養(yǎng)5 d 的原代神經(jīng)元建立氧糖剝離（oxygen and glucose deprivation，OGD）模型。實驗分為實驗組1：OGD 模型制備后，更換培養(yǎng)液為含葡萄糖的神經(jīng)元完全培養(yǎng)基，以形成再灌注；取再灌注0、2、4、8、12、24 h 觀察；對照組1：正常培養(yǎng)液孵育的神經(jīng)元；實驗組2：U0126預(yù)處理神經(jīng)元后制備OGD 模型，于再灌注后4、8 h 觀察；對照組2：DMSO 預(yù)處理神經(jīng)元后制備OGD 模型，余同實驗組2。應(yīng)用Western blot 定量測定各組HIF-1α、VEGF 蛋白及ERK1/2、p-ERK1/2 的表達(dá)變化，SABC 免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測p-ERK1/2、HIF-1α 蛋白表達(dá)及分布情況。 結(jié)果 培養(yǎng)5 d 的皮質(zhì)神經(jīng)元突起間互相連接成網(wǎng)狀。實驗組1 HIF-1α、VEGF 蛋白表達(dá)逐漸升高，8 h 表達(dá)量最高，12 h 后逐漸下降，與對照組1 比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。各時間點實驗組1 與對照組1 ERK1/2 蛋白表達(dá)無明顯差異（P gt; 0.05）。實驗組1 p-ERK1/2 蛋白表達(dá)在2 h 時開始增加，4 h 達(dá)高峰，8 h 開始下降，與對照組1 比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01）；實驗組2 p-ERK1/2 蛋白表達(dá)下降，HIF-1α 及VEGF 蛋白表達(dá)也隨之下調(diào)，與對照組2 比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。各時間點實驗組2 和對照組2 ERK1/2 蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示神經(jīng)元黃棕色著色減弱，p-ERK1/2、HIF-1α 表達(dá)下降。 結(jié)論 HIF-1α及其靶基因VEGF 蛋白在OGD 再灌注后的皮質(zhì)神經(jīng)元表達(dá)具有一定時間規(guī)律性，抑制ERK1/2 信號通路后這兩個蛋白表達(dá)均下降，提示該通路在神經(jīng)元OGD 后誘導(dǎo)HIF-1α 及VEGF 的調(diào)控中起重要作用。
引用本文： 張莉,屈藝,張筱嵐,楊春蕾,毛萌,母得志. 皮質(zhì)神經(jīng)元缺氧缺血后缺氧誘導(dǎo)因子1α 表達(dá)與細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶信號通路的關(guān)系. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2009, 23(8): 954-958. doi: 復(fù)制