目的 通過檢測熒光微球655(quantum dot 655,QD655)標記SD 大鼠BMSCs 的體外細胞毒性、細胞增殖、細胞貼附性以及標記率,探討QD655 標記BMSCs 及其示蹤的可行性。 方法 收集2 周齡健康SD 大鼠股骨和脛骨骨髓,貼壁培養(yǎng)BMSCs。取第3 代BMSCs 采用QD655 標記作為實驗組,以未標記BMSCs 作為對照組,采用錐蟲藍拒染法檢測細胞存活率,MTT 法觀察QD655 對細胞增殖性的影響;取實驗組BMSCs 向成骨誘導分化培養(yǎng)2 周,采用茜素紅、ALP 染色定性鑒定細胞成骨分化能力,實時熒光定量PCR 鑒定標記對細胞成骨分化的影響;分別在標記后即刻、1、2、4、6 周采用熒光顯微鏡動態(tài)檢測實驗組BMSCs 陽性標記率;掃描電鏡觀察實驗組細胞在膠原/ 生物活性玻璃復合材料上的貼附性。 結果 實驗組與對照組細胞存活率均 gt;90%,比較差異無統(tǒng)計學意義(P gt; 0.05);培養(yǎng)1、3、5、7、9 d,兩組細胞增殖率比較差異均無統(tǒng)計學意義(P gt; 0.05)。實驗組BMSCs 經成骨誘導分化2 周后,茜素紅及ALP 染色均呈陽性,實時熒光定量PCR 檢測實驗組BMSCs 的骨橋蛋白、骨鈣素、Ⅰ型膠原、ALP、BMP-2 mRNA 較對照組成倍數(shù)高表達。實驗組BMSCs 標記后即刻陽性標記率達96.50% ± 1.59%,隨著標記時間延長標記率下降,標記后1、2、4、6 周標記率分別為93.30% ± 1.51%、72.40% ± 2.90%、40.10% ± 3.60%、10.00% ± 1.70%,對照組各時間點陽性標記率均為0。掃描電鏡觀察示實驗組標記后細胞和材料貼附良好。 結論 QD655 對大鼠BMSCs 標記時間長,標記率及安全性高,是一種良好標記 物。
引用本文: 姜曉銳,張鑫鑫,楊科躍,江汕,金丹,王丹,裴國獻. 熒光微球體外標記大鼠BMSCs 的初步研究. 中國修復重建外科雜志, 2010, 24(6): 744-748. doi: 復制
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