摘要： 目的 探討并改進從人骨髓中分離、誘導(dǎo)培養(yǎng)和體外擴增內(nèi)皮祖細胞(EPCs)的方法，為EPCs參與基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法 采用不同的細胞分離液，用密度梯度離心法從正常人骨髓中分離單個核細胞(hBMMNCs)，分別培養(yǎng)在包被人纖維連接蛋白(HFN包被組)，包被明膠(明膠包被組)和未包被(未包被組)的培養(yǎng)皿內(nèi)，利用EBM-2培養(yǎng)4～7d后出現(xiàn)細胞克隆集落(cell colony-forming units,CFUs)，挑選內(nèi)皮祖細胞樣CFUs繼續(xù)培養(yǎng)(CFUs挑選法)，采用流式細胞儀檢測CD34+ KDR+和CD133+ KDR+雙熒光陽性細胞，細胞免疫化學(xué)法檢測EPCs表面標(biāo)記CD133、CD34、CD31、vWF和KDR的表達。 結(jié)果 用OptiprepTM分離液可從人骨髓中更有效地分離出hBMMNCs，進而誘導(dǎo)獲取更多EPCs并可進行體外培養(yǎng)擴增；流式細胞儀檢測結(jié)果顯示CD133+ KDR+細胞高達70.4%±5.4%， CD34+KDR+細胞高達69.1%±8.7%；HFN包被組和明膠包被組細胞生長一樣旺盛，均可促進EPCs的貼壁生長，促進其生長的作用差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P gt;0.05)，而未包被組細胞生長數(shù)量最少。培養(yǎng)7d的貼壁細胞表面標(biāo)記CD133、CD31、vWF和KDR均呈陽性，培養(yǎng)14d 的貼壁細胞表面標(biāo)記CD34呈陽性。 結(jié)論 CFUs挑選法可以從人骨髓中成功地獲取更多EPCs并在體外擴增，提出了另一種獲取EPCs的高效簡單方法，進一步拓寬了獲取EPCs的方法和范圍。
引用本文： 柳瑞軍,鐘竑,單根法,許勤,熊健. 人骨髓內(nèi)皮祖細胞的分離、誘導(dǎo)培養(yǎng)和擴增. 中國胸心血管外科臨床雜志, 2008, 15(2): 113-117. doi: 復(fù)制