目的 建立急性肺損傷肺泡上皮細(xì)胞炎癥模型, 探討NF-κB p65 基因在炎癥誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷中的作用。
方法 以腫瘤壞死因子α( TNF-α, 10 ng/mL) 刺激A549 細(xì)胞, 運(yùn)用RNA 干擾技術(shù)沉默核因子κB( NF-κB) p65 基因, 采用RT-PCR 及Western blot 法檢測(cè)沉默效率, ELISA 法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中白細(xì)胞介素1β( IL-1β) 、IL-4、IL-6 等炎癥因子濃度, 比色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)丙二醛( MDA) 及超氧化物歧化酶( SOD) 濃度, MTT 法檢測(cè)細(xì)胞存活率。
結(jié)果 TNF-α刺激A549 細(xì)胞可在基因及蛋白水平上調(diào)NF-κB p65 的表達(dá), 并增加NF-κB 蛋白的核轉(zhuǎn)位; 同時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-1β、IL-4、IL-6 的濃度升高, 細(xì)胞內(nèi)MDA 增多, SOD 減少, 細(xì)胞存活率降低。預(yù)轉(zhuǎn)染NF-κB p65 siRNA 可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-κB p65 表達(dá), 降低TNF-α誘導(dǎo)的上述各炎癥因子及MDA 濃度的增高, 減少SOD 的耗損, A549 細(xì)胞存活率升高( P lt;0.05) 。
結(jié)論 NF-κB 能介導(dǎo)TNF-α觸發(fā)的過(guò)度炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激, 導(dǎo)致細(xì)胞存活率明顯降低; 沉默NF-κB p65 基因可有效下調(diào)炎癥反應(yīng)水平及其誘發(fā)的氧化應(yīng)激, 減輕肺結(jié)構(gòu)細(xì)胞的損傷。
引用本文： 吳煒景 ,李理,袁偉鋒,李偉峰,黃文杰. NF-κB p65 基因在TNF-α誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞氧化損傷中的作用. 中國(guó)呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志, 2012, 11(1): 46-51. doi: 復(fù)制